小鼠磷酸試劑盒是一種專用于定量檢測小鼠生物樣本（如血清、血漿、組織勻漿液或細(xì)胞裂解液）中無機(jī)磷酸鹽（Pi）含量的生化檢測試劑盒，廣泛應(yīng)用于代謝研究、腎功能評估、骨代謝調(diào)控、能量代謝（如ATP水解）及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路（如蛋白磷酸化/去磷酸化）等相關(guān)科研領(lǐng)域。該試劑盒基于經(jīng)典的鉬藍(lán)比色法或酶促反應(yīng)原理，具有操作簡便、靈敏度高、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，適用于高校、科研院所及生物醫(yī)藥企業(yè)的實(shí)驗(yàn)室使用。
一、測定步驟
1.準(zhǔn)備與配液
從冰箱取出試劑盒，室溫復(fù)溫平衡30分鐘。
用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
2.加樣
取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板，固定于框架上，分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置。
在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）；空白對照孔不加。
3.溫育與洗板
37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機(jī)按說明書操作洗板）。
4.加酶標(biāo)工作液與再次溫育洗板
每孔加入酶標(biāo)工作液50μL，空白對照孔不加。
重復(fù)上述溫育與洗板步驟。
5.顯色與終止
每孔先加入顯色劑A液50μL，再加入顯色劑B液50μL，37℃避光顯色15min。
取出酶標(biāo)板，每孔加終止液50μL，終止反應(yīng)（顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
6.測定與計算
以空白孔調(diào)零，在終止后15分鐘內(nèi)，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）。
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值，計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度，也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。
二、使用注意事項
1.試劑保存與使用
試劑盒應(yīng)保存在28℃，避免直接接觸終止液和底物A、B。
不同批號的試劑盒組份避免混用（洗滌液和反應(yīng)終止液除外）。
濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，但加熱溫度不要超過50℃。
2.加樣與溫育
各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
嚴(yán)格按照規(guī)定的時間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫2025℃。
3.洗板與顯色
洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。
4.其他注意事項
消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
所有樣品、洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
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更新時間：2026-01-28 
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