小鼠磷酸試劑盒是一種專用于定量檢測小鼠生物樣本(如血清、血漿、組織勻漿液或細(xì)胞裂解液)中無機(jī)磷酸鹽(Pi)含量的生化檢測試劑盒,廣泛應(yīng)用于代謝研究、腎功能評估、骨代謝調(diào)控、能量代謝(如ATP水解)及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路(如蛋白磷酸化/去磷酸化)等相關(guān)科研領(lǐng)域。該試劑盒基于經(jīng)典的鉬藍(lán)比色法或酶促反應(yīng)原理,具有操作簡便、靈敏度高、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn),適用于高校、科研院所及生物醫(yī)藥企業(yè)的實驗室使用。
基本工作原理:
1、雙抗體夾心法:這是常用的原理,以小鼠蛋白酪氨s磷酸酶(PTP)檢測試劑盒為例,先用純化的小鼠蛋白酪氨s磷酸酶抗體包被微孔板,制成固相抗體。之后向包被單抗的微孔中依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體。經(jīng)過溫育并徹d洗滌后,用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠蛋白酪氨s磷酸酶的含量呈正相關(guān)。
2、競爭法:當(dāng)待測物質(zhì)具有多個抗原表位時可能會用到。先使未標(biāo)記的抗原(樣本中的磷酸化物質(zhì))與有限l的特異性抗體進(jìn)行反應(yīng),然后再加入標(biāo)記的抗原(通常是已知濃度且?guī)в锌蓹z測標(biāo)記物的相同或相似抗原)。標(biāo)記抗原會與未標(biāo)記抗原競爭結(jié)合有限的抗體結(jié)合位點(diǎn)。反應(yīng)達(dá)到平衡后,分離游離的和結(jié)合的標(biāo)記抗原,通過檢測與抗體結(jié)合的標(biāo)記抗原量來推算出樣本中未標(biāo)記抗原的含量。
3、間接法:主要用于檢測樣本中是否存在針對磷酸化相關(guān)物質(zhì)的抗體。先將特異性的磷酸化抗原包被在微孔板上,加入待測樣本,如果樣本中含有相應(yīng)的抗體,就會與包被的抗原結(jié)合。然后加入酶標(biāo)記的二抗(能識別并結(jié)合一抗),經(jīng)過溫育和洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后,加入底物顯色。根據(jù)顏色的深淺可以判斷樣本中抗體的含量。
優(yōu)點(diǎn):
1、靈敏度高:具備出色的檢測下限,即使是微量的磷酸化蛋白也能被靈敏捕捉。這使得研究人員可以在疾病早期或細(xì)胞輕微變化時就察覺到信號差異,從而及時開展進(jìn)一步的研究。比如在研究細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中一些低表達(dá)的磷酸化蛋白時,使用小鼠磷酸試劑盒就能夠準(zhǔn)確地檢測到其存在和變化,為深入探究細(xì)胞內(nèi)的生理病理機(jī)制提供了有力支持。
2、特異性強(qiáng):采用先進(jìn)的抗體制備技術(shù),能夠特異性地識別目標(biāo)磷酸化蛋白,有效避免了與其他類似物的交叉反應(yīng)。無論是血清、血漿還是組織勻漿等不同類型的樣本,都能實現(xiàn)準(zhǔn)確的測定。例如在復(fù)雜的生物樣本如全血樣本中,即使存在多種其他蛋白質(zhì)成分,該試劑盒依然可以精準(zhǔn)鎖定目標(biāo)分子,確保檢測結(jié)果的真實性和可靠性。
3、操作簡便:設(shè)計人性化,實驗步驟清晰明了。從樣本處理到最終的結(jié)果讀取,都有詳細(xì)的說明書指導(dǎo)。即使是經(jīng)驗相對不足的科研人員也能快速上手,節(jié)省了大量的時間和精力。同時,配套齊全的試劑組分讓整個實驗過程更加流暢高效,不需要額外準(zhǔn)備過多的試劑和材料,減少了實驗的復(fù)雜性和誤差來源。
4、穩(wěn)定性好:保質(zhì)期通常較長,在28℃低溫保存下一般有6個月的保質(zhì)期。并且經(jīng)過嚴(yán)格的效價穩(wěn)定性測試,如有些試劑盒所有組份做過42度7天破壞實驗,產(chǎn)品效價降低幅度不超過7,能確保運(yùn)輸過程中的溫度變化不會對試劑盒造成效價影響,保證了實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。
5、服務(wù)完善:許多供應(yīng)商提供免費(fèi)代測服務(wù)和技術(shù)指導(dǎo),對于外地客戶還可以指導(dǎo)正確放置樣本的保存方式后快遞到技術(shù)部進(jìn)行檢測,本地客戶則可享受免費(fèi)上門取樣服務(wù)。售后也有專業(yè)的技術(shù)指導(dǎo),幫助解決實驗過程中遇到的問題,確保實驗順利進(jìn)行。
